細胞関連の実験を行う友人は、細胞凍結法を頻繁に使用する必要があります。 つまり、細胞凍結保存とは、長期保存の目的を達成するために、細胞を低温環境で保存することです。 細胞は、感染の過程である程度の突然変異を起こします。 細胞汚染や突然変異が発生した場合でも細胞を確実に使用できるようにするために、通常、一部の細胞は凍結に使用されます。
細胞凍結の原理
細胞の凍結と回収の原理の一つが、細胞の生命力を最大限に保つ「徐冷融合」です。 簡単に言うと、凍らせて冷やすときはゆっくりと、低温から戻すときは急速に加熱する必要があります。 ゆっくり凍結する理由は、細胞を液体窒素などの超低温環境に直接置くと、細胞が大きな氷の結晶を形成し、細胞にダメージを与えるためです。
ゆっくりと凍結すると、細胞を保護するという目的を達成するために、細胞がゆっくりと脱水されます。 また、回復する際に、小さな氷の結晶が大きな氷の結晶、つまり重い氷の結晶になるのを防ぐためでもあります。 そのため、通常、細胞凍結を皆さんが行うと、必ず細胞に損失が発生し、凍結の段階で影響が出やすいと考えられます。
細胞凍結のいくつかの方法
手動による方法: 凍結した細胞は通常、液体窒素中で保存されます。 手動操作方法は、グラジエントを冷蔵庫で冷却することです。 細胞を凍結保存管に保存し、順に4℃、-20℃、-80℃の冷蔵庫環境に置きます。 -80℃で 24 時間凍結させた後、液体窒素に移します。 手動冷却では、他の消耗品を追加で補充する必要はありません。 手動でも操作可能です。 それは最も単純ですが、単純ではありません。 実際の操作は面倒です。 そして、この冷却方法はまだ均一ではなく、より壊れやすい細胞には必ずしも適用できないため、効果はあまり良くありません。
勾配冷却ボックス : 市販の勾配冷却ボックスは、凍結プロセスの均一な冷却に特に使用されます。 冷却速度は通常、-1 度/分です。 凍結した保存管を勾配冷却ボックスに入れ、勾配冷却ボックスを直接-80℃の冷蔵庫環境に置き、手動勾配操作を行わずに一晩過ごします。 次に、デポジットチューブを下げて液体窒素の中に入れます。 市販の冷却ボックスはほぼ均一な冷却速度を確保できるため、勾配冷却ボックスを使用する効果はより優れています。
市販されている一般的な勾配冷却ボックスは 2 つあります。 通常、PC ボックス本体にイソプロピルを追加する必要があります。 ご使用の際は箱内の目盛線にイソペノールを加えてご使用ください。 イソプロパノールは、熱の貯蔵と分配のためのキャリアとして使用されます。
別の種類はイソプロピルを添加する必要がなく、発泡し、使用中に冷凍庫に直接置くことができ、操作がより便利です。
イソプロパノールの冷却ボックスは数回使用したら液体を交換することをお勧めしますが、イソプロパノールは実験や環境に悪影響を与える有害な液体であるため、通常は数回使用できます。 ただし、液体がある程度の量であることを確保する必要があります。
プログラムされていない冷凍保管: 市販されているプログラムされていない冷凍液体を使用してください。 従来の凍結液体と比較して、内部コンポーネントは氷結晶の細胞へのダメージを軽減できるため、勾配を使用して冷却する必要がなく、勾配冷却ボックスも必要ありません。 冷凍保管は、-80 ℃の冷蔵庫環境に直接置くことができます。
多くの細胞サンプルは非常に貴重です。 私たちだけでなく、実験をするときにも使わなければなりません。 関連商品の選択においても、できるだけ良い商品を選ぶ必要があります。 認定された品質の凍結保存チューブを選択し、凍結には勾配冷却ツールを使用して、軽微な損傷による小さな損失を避けるために細胞への低損傷の保証を最大限に高めます。