あなたが欲しい微生物の知識
微生物は、自然界に広く存在し肉眼では見えない小さな生物の集まりであり、光学顕微鏡や電子顕微鏡を使用して数百、数千、さらには数万倍に拡大する必要があります。 体が小さく、構造が単純で、繁殖が速く、変化が容易で、環境適応力が強いという利点があります。
微生物の分類:
微生物には多くの種類があり、少なくとも 100 種類以上000あります。 その構造から、化学組成や生活習慣などの違いから3つに分類できます。
真核生物の微生物細胞の核は、核膜、核小体、染色体など、より高度な分化をしています。 細胞質には、完全なオルガネラ (小胞体、リボソーム、ミトコンドリアなど) があります。 菌類はこのタイプの微生物に属します。
原核微生物細胞は、核分化の程度が低く、原始核質のみであり、核膜および核小体はありません。 オルガネラは完全ではありません。 細菌、スピロヘータ、マイコプラズマ、リケッチア、クラミジア、放線菌など、そのような微生物には多くの種があります。
無細胞微生物は、典型的な細胞構造やエネルギーを生成する酵素系を持たず、生きた細胞でのみ成長し、繁殖することができます。 ウイルスはこのタイプの微生物に属します。
微生物の分離精製
複数の種を含む微生物培養は、混合培養と呼ばれます。 コロニー内のすべての細胞が 1 つの親細胞に由来する場合、そのコロニーは純粋培養と呼ばれます。 細菌種の同定では、使用される微生物は一般に純粋な培養物である必要があります。 純粋な培養物を得るプロセスは分離精製と呼ばれ、多くの方法があります。
1. ポアプレート法
まず、微生物懸濁液を段階的に希釈し、一定量の希釈液を溶解した栄養寒天培地と十分に混合し、約 40-50 度に維持した後、混合物を滅菌シャーレに注ぎます。 固化後、プレートを逆さにしてコンスタントチャンバーでインキュベートした。 単一の細胞を増殖させてコロニーを形成し、単一のコロニーを採取して懸濁液を作製し、上記の手順を数回繰り返して純粋な培養物を取得します。
2. 平板塗装法
まず、微生物懸濁液を適切に希釈し、一定量の希釈液を固化した無菌栄養寒天プレートに置き、無菌ガラス スパチュラで希釈液を培地の表面に均一に広げます。 一定温度で培養することによりシングルコロニーを得ることができます。
3.プレートスクライブ法
微生物を分離する最も簡単な方法は、ストリーキングです。 無菌ループを使用して、プレートに少量の培養物をストリークします。 落書きの方法はたくさんあります。 単一のコロニーが表示される可能性が高い一般的なスクライブ方法は、スラッシュ法、カーブ法、スクエア法、放射法、および 4 グリッド法です。 接種ループが培地の表面を後方に移動すると、接種ループ上の菌液が徐々に希釈され、最終的に単一の細胞が描画された線上に散布されます。 培養後、各細胞はコロニーに成長します。
4. 増菌培養法
増菌培養法の方法と原理はとてもシンプルです。 目的の微生物だけが増殖できる条件を作ることができ、その条件下で目的の微生物は他の微生物と効果的に競合し、他の微生物をはるかに凌駕する増殖能力を発揮します。 いくつかの義務的な寄生虫を分離する場合は、サンプルを対応する影響を受けやすい宿主細胞集団に接種して、大量に増殖させる必要があります。 播種を繰り返すことにより、純粋な寄生菌を得ることができます。
5.嫌気法
実験室では、一部の嫌気性細菌を分離するために、元の培地を含む試験管を培養容器として使用でき、試験管を沸騰水浴で数分間加熱して、培地中の溶存酸素を追い出すことができます. その後、急速に冷却して接種します。 接種後、無菌パラフィンを培地の表面に加えて、培地を空気から隔離した。 別の方法は、接種後に培地中のガスをN2またはCO2で置換し、試験管の口を火の上で密閉することです. 一部の嫌気性細菌をより効率的に分離するために、分離したサンプルを培地に接種し、ペトリ皿を完全に密閉された嫌気性培養装置に入れることができます。
6. 単一細胞 (または単一胞子) の分離方法
純粋な培養物を得るために、混合培養集団から単一細胞または単一個体を直接分離するマイクロ分離法を採用することです。 より大きな微生物の場合、キャピラリーを使用して単一の個体を抽出できます。 比較的小さな個体の微生物の場合、顕微鏡下でキャピラリーまたはマイクロニードル、フック、ループなどを使用して単一の微生物細胞または胞子を採取し、純粋な培養物を得るマイクロマニピュレーターが必要です。 単一細胞分離法は、操作技術に対する要求が比較的高い。
微生物培養
1. 培養時に酸素が必要かどうかによって、好気培養と嫌気培養の2つに分けられます。
有酸素培養：「好気培養」とも呼ばれます。 つまり、この微生物を培養する際には、酸素を加えないとうまく育たないのです。 実験室では、綿栓を介して外側から無菌空気を得ることにより、傾斜培養が得られます。 三角フラスコ内の培養液の大部分はシェーカーで振とうするため、ボトル内に外気が連続的に入ります。
嫌気培養：「嫌気培養」ともいう。 このような微生物は、培養に参加するのに酸素を必要としません。 嫌気性微生物の培養過程で最も重要なポイントは、培地中の酸素を除去することです。
2. 培地の物理的状態によって、固体培養と液体培養の 2 つのカテゴリーに分けることができます。
固体培養：菌株をゆるく栄養豊富な固体培地に接種し、適切な条件下で微生物を培養する方法です。
液体培養：実験では、液体培養は微生物を急速に増殖させ、多数の培養物を得ることができます。 特定の条件下では、微生物が細菌を選択して濃縮する効果的な方法でもあります。
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