ELISAの結果が悪い？私たちに従って、正しい Elisa プレートを選択してください。
適切な ELISA プレートを選択することは、ELISA 実験を成功させるための最初のステップですが、多くの人はこれを無視しています。 人は実験を行うとき、実験そのもののことしか考えず、製品が実験に大きな影響を与えていることを知らないことがよくあります。 製品の適切な選択は、実験の成功に貢献します。 ELISA実験を行う際には、通常、次の要因を考慮します。
1.底の形状
現在、メーカーは酵素標識ウェルを独立したカラムとして設計し、ウェル間の距離を適切に広げて独立して分離できるようにすることで、クロスコンタミネーションを最小限に抑えています。 Elisa プレートの種類によって、ウェルの底の形状が異なります。 一般的な穴の底の形状は次のとおりです。
フラットボトム：底が水平で、Fボトムとも呼ばれます。 光は、光を最大限に透過できる底を通して偏向されません。 視認性やその他の理由で丸底が必要な実験に使用します。
丸底: U 底とも呼ばれ、最高の洗浄結果とハイブリッド性能を提供し、堆積物をテストする必要がある用途に適しています。
C底：平底と丸底の間に良好な洗浄効果をもたらし、平底の利点を組み合わせます。
コーンボトム: V ボトムとも呼ばれ、微量サンプルの正確なサンプリングと保管に適しており、少量の最適な回収が可能です。
2.エリサプレートの色
Elisa プレートの色は、透明、黒、白の 3 色です。
ELISA の大部分は、実験材料として透明なプレートを選択します。 白と黒の Elisa プレートは、通常、発光検出に使用されます。 黒色のELISAプレート自体が光を吸収するため、白色のELISAプレートよりもシグナルが弱くなります。 ブラック Elisa プレートは、通常、蛍光検出などの強い光を検出するために使用されます。 逆に、白い Elisa プレートは弱い光の検出に使用でき、一般的な化学発光や基質の発色 (デュアル ルシフェラーゼなど) によく使用されます。 レポーター遺伝子解析）。
3.エリサプレートの材質
一般的な材料は、ポリエチレン (PE)、ポリプロピレン (PP)、ポリスチレン (PS)、ポリ塩化ビニル (PVC)、およびポリカーボネート (PC) です。
ELSIA で最も広く使用されている材料は、ポリスチレンとポリ塩化ビニルです。 塩ビ軟質板は薄く、カットでき、価格も安い。 欠点は、ポリスチレン板ほど仕上がりが良くないことと、穴の底がポリスチレンほど平らではないことです。 ただし、対応するバックグラウンド値も増加します。 通常、ELISAプレートの表面にイオングラフト処理を行い、ポリマー表面にアルデヒド基、アミノ基、エポキシ基などの活性官能基を導入し、基板表面の性能を向上させます。
4. 異なる結合メカニズム
プレートの底面へのコーティング材料の効率的な結合は、ELISA の重要なステップです。 したがって、適切な Elisa プレートを選択する実験の前に、コーティングする物質の構造特性と化学的特性を慎重に分析する必要があります。 一般的に言えば、コーティング材料をプレートの底に結合させる方法はいくつかあります。受動吸着、共有結合、アフィニティー キャプチャーです。
受動吸着: 受動吸着のメカニズムは複雑で、コーティング材料とプレートの底の間の結合は、主に分子間力 (ファン デル ワールス力) と水素結合に依存しています。 ほとんどの ELISA では、プレートの底へのコーティング物質の結合は受動吸着によって行われます。 一般に、中分子量および高分子量の抗原 (または抗体) とプレートの底部との間の結合は、受動吸着によって達成されます。 Elisa プレートを選択する際には、プレートの底面の疎水性/親水性の特性が考慮されることがよくあります。 次の表に、さまざまな親水性基材表面の適用範囲と使用方法を示します。
親水性 | 優先バインディング | 主な使い方 |
- | 脂質、リポタンパク質、大型タンパク質などの重要な疎水性領域を含む分子 | 抗原 ELISA、Fla、LIA |
プラス | 親水性/疎水性の特性を持つ生体分子: 中型から大型のタンパク質、免疫グロブリン、アルブミン | 二重抗体サンドイッチELISA、抗原ELISA |
プラスプラス | 親水性/疎水性の特性を持つ生体分子: 小型から大型のタンパク質、免疫グロブリン、アルブミン、LPS、リン酸化タンパク質、糖タンパク質など | 二重抗体ELISA、FIA、LIA |
プラス プラス プラス | 糖タンパク質、極性脂質分子、リン脂質、心臓脂質 | 抗原ELISA |
アフィニティ キャプチャ: アフィニティ キャプチャは、対応する受容体への標識高分子の特異的結合に基づいています。 タグ付けされた高分子は、化学結合または遺伝子工学のいずれかによって取得できます。
アフィニティ キャプチャの機能は次のとおりです。
1.特異性が高い
2.測定結果の信号対雑音比を改善できます
より一般的なウェルの底面は次のとおりです。ストレプトアビジン (ストレプトアビジン) コーティングされた表面。 ニッケルキレート (Nickel Chelate) でコーティングされた表面とグルタチオン (Glutathione、GSH) でコーティングされた表面。
3. ストレプトアビジン表面: ストレプトアビジンとビオチンの高い親和性と特異性を利用して、コーティングされたタンパク質へのボトムプレートの結合を実現します。
4. ニッケルキレート表面: ニッケルキレートがポリマー表面に結合して、融合タンパク質を His (ヒスチジン) タグと結合します。
5. グルタチオン表面: グルタチオンとグルタチオン スルフヒドリルトランスフェラーゼ (GST) の間の酵素および基質特異性を使用して、ボトム プレートをコート タンパク質に結合させます。
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